Mikroskop u homebrewingu

[pivska mušica]

Mikroskop u homebrewingu

Nabavio sam mikroskop i evo da pokusam razjasniti par stvari svima onima kojima padne na pamet da se upuste u nabavku ove sprave.

Prije svega, ako imate dijete/djecu, zeni uvijek mozete provuci pricu da kupujete za edukacijske svrhe radi djeteta , sto i ne bi bilo daleko od istine, jer se definitivno moze koristiti i u te svrhe i vjerujem da bi bilo neizmjerno zanimljivo (i korisno) djeci jer se osim kvasca moze jos štošta posmatrati s mikroskopom.

Što se homebrewinga tiče mikroskop definitivno nije nešto što se mora imati, ali ako znate kako iskoristiti koristi koje donosi može biti vrlo vrijedan komad opreme. U homebrewingu se koristi otprilike za tri vazne stvari:

1. brojanje ćelija (najvažnija funkcija)
2 provjera vitalnosti ćelija
3. provjera viabilnosti ćelija

Ja dugo oko toga razmisljam, a kupio sam svoj jer sam slučajno naišao na neku akciju koja je bila bas povoljna. Inače, tesko da bih se upustio u ovo. Poslije sam skontao da treba jos dosta neke opreme uz njega pa se i trošak povećao, ali šta da se radi.

Evo kako otprilike izgleda setup:




Od opreme je potrebno:

1. Mikroskop
2. Hemocitometar
3. Lugolova otopina i plavi metilen (markeri)
4. Predmetna stakalca i pokrovna stakalca
5. Kapsule od 1 mL za uzorke
6. Pipeta








Kod kupovine mikroskopa treba odabrati mikroskop koji ima minimalno 400x uvećanje i to je minimum (odnosno optimum) za brojanje ćelija. Na ebayu mozete naići na neke USB mikroskope koji imaju i do 1000x povecanje ali to je sve jako loša roba i nećete ništa moći s tim. Potreban je neki entry level mikroskop, poželjno sa USB kamerom na okularu.

Ovako izgleda potpuno zdrava ćelija kvasca (US05) pod mikroskopom:


Ćelija mora imati okrugli oblik i mora imati određenu veličinu da bi se smatrala potpuno zdravom. Ćelije koje su iscrpljene i pregladnjele dobiju ovalni, spljošteni oblik lopte za ragbi i smanje se veličinom. To su ćelije u hibernaciji. Takve ćelije su obično u tekućim kvascima starijim od mjesec dana.

Hemocitometar je posebno staklo za brojanje ćelija na kojem je urezana mreža pomoću koje se broje ćelije. Inače, nije baš jeftino, koštalo me oko 25$. Za pravilno brojanje je potrebno primjeniti posebnu proceduru i morao sam se bas oko toga zabaviti da skontam sta i kako jer nisam nikada imao nikakvog iskustva sa sličnim stvarima. Uzorak je potrebno razrijediti jer je koncentracija ćelija u starteru tolika da bi se preklapale i nista ne bi bilo jasno. Sve to ide konacno u formulu kojom se dobija ukupan broj celija u starteru.

Ovako izgleda hemocitometar:




A ovako izgleda kvasac na mreži hemocitometra pomoću koje se broje ćelije:


Osim broja ćelija koji je potreban za naše pivo, uz pomoć mikroskopa se mogu razaznati žive ćelije od mrtvih ćelija (viabilnost), te zdravije od nezdravijih ćelija (vitalnost). Ovo radimo farbanjem uzoraka markerima - Lugolovom otopinom i plavim metilenom.





Jedan od glavnih znakova da je ćelija zdrava je zaliha glikogena koju nosi u sebi. Kada ofarbamo uzorak lugolovom otopinom unutar ćelije se ofarba samo glikogen i moguće je otprilike vidjeti koliko procenutalno glikogena ćelija sadrži u sebi. To se moze vidjeti na ovoj slici:


Ovdje imamo dosta žućkaste boje u svim ćelijama i to znači da se ova kultura može smatrati potpuno zdravom i spremnom za fermentaciju.

Osim količine glikogena, moguće je provjeriti i koje su ćelije mrtve, a koje žive. To se radi sa plavim metilenom kojim se opet ofarba uzorak. Mrtve ćelije će u potpunosti probiti farba i one će poplaviti, dok će žive zbog metabolizma odbiti prodor farbe kroz membranu i izgledat će normalno. Kod brojanja na hemocitometru moguće je ovom metodom odrediti % mrtvih ćelija u uzorku i ovo je isto jako korisna funkcija mikroskopa.

Ovako izgledaju mrtve ćelije (ofarbane plavo):



(Inače ove sam ja namjerno ubio za potrebe eksperimenta, pokoj im duši)

Uz mikroskop sam saznao nekoliko jako vaznih stvari. Na primjer svi kalkulatori tipa mr.malty i sl. daju samo priblizne rezultate koji u nekim slucajevima mogu jako varirati. Posebno kad se racuna kolicina potrebnog slurry-a.

Isto mi je bilo jako zanimljivo kako se celije razlicitih sojeva kvasca razlikuju kako velicinom tako i oblikom i nabijenošću. 1 mL slurry-a od WLP002 (odličan flokulant) nije ni približno isto što i 1mL slurry-a od na primjer Saison kvasca, a otkloni u broju ćelija mogu biti jako veliki.

Evo napravio sam dva klipa na kojima je prikazan isti uzorak iz dva isprana kvasca, da vidite otprilike o čemu se radi:





Mikroskop oduzme nešto vremena prilikom kuhanja, ali je jako bitno da se razvoj kulture u starteru može pratiti cijelo vrijeme i da sad mogu tačno znati koliko imam ćelija u starteru prije dodavanja kvasca u pivo, što su korisni podaci jer za eventualne probleme kasnije mogu sigurno isključiti na primjer underpitch/overpitch. Osim toga, ako od nekoga uzmem ispran kvasac (ili ga ja sam isperem) uvijek mogu izbrojati ćelije i provjeriti koliko je % viabilan i vitalan uz pomoć ovih otopina.

Ako ima kakvih pitanja i ako mogu kome pomoći (na primjer sa određivanjem količine ćelija u 1 mL slurry-a pojedinih kvasaca), stojim na raspolaganju.

[Rodney]

Mikroskop u homebrewingu

Ma ti si lud

Nego, nisi pomenuo cijenu. Koliko to sve košta i je li moguće recimo otiđi u lab kod nekoga i vidjeti šta se dešava sa ćelijama koje trenutno množimo?

[dalidj]

RE: Mikroskop u homebrewingu

^ Uzem mi rec iz usta.
Svaka tebi cast, podigao si Home brewing na visi nivo.

[pivska mušica]

RE: Mikroskop u homebrewingu

Rodney, sve je kostalo nesto vise od 100EUR + sitnice. U neciji lab mozes otici, ali je poenta u tome da pratis starter kako se razvija i da na dan kuhanja baratas konkretno sa brojem celija kojim raspolazes tako da je ovo vise puta u upotrebi prije, ali i nakon kuhanja. Inace, po mom misljenju, ako nisi u mogucnosti odrediti broj celija, onda je uvijek bolje ici u overpitch nego u underpitch (osim ako se suprotno ne radi namjerno).

Dalidj tnx, pa nisam nista posebno podigao, ljudi ovo koriste normalno u homebrewingu jedino sto sam dosta nekih stvari razjasnio sam sebi, a nadam se da ću još toga uspjeti saznati i time unaprijediti svoja piva. U principu meni djavo neda mira i mene to kopka tako da mi je sve ovo jako zanimljiva aktivnost, trebalo mi je dosta vremena da iščitam kako i šta, tako da non stop neka unaprijeđenja i nadogradnje zato je ovo najbolji hobi na svijetu

[Rodney]

Mikroskop u homebrewingu

Pa dobro, relativno malo para za tako nešto. Bilo bi dobro imati, ali i fermentor mi je na pragu već, tako da ako unesem i ovo u kuću, mogu samo izaći s koferom

Znači tečni kvasci vozdra?

[AleksandarV]

RE: Mikroskop u homebrewingu

Pa nije mikroskop tolika skalamerija. Cijena je od nekih 20-100 Km na PIK-u.

[pivska mušica]

RE: Mikroskop u homebrewingu

Pa dobro, relativno malo para za tako nešto. Bilo bi dobro imati, ali i fermentor mi je na pragu već, tako da ako unesem i ovo u kuću, mogu samo izaći s koferom

ma joj suti, ne pitaj, moji su koferi spakovani, samo čekam

a sto se cijene tice to je bilo na akciji, a ovaj mikroskop je po performansama minimum minimuma da bi bio iskoristiv za home brewing.

Znači tečni kvasci vozdra?

ne, ni slucajno samo ih treba tretirati na pravi nacin i to je to.

[pivska mušica]

RE: Mikroskop u homebrewingu

Pa nije mikroskop tolika skalamerija. Cijena je od nekih 20-100 Km na PIK-u.

da, samo to nisu sa USB kamerom. bez USB kamere i softvera za brojanje to je jedan jaaako naporan posao. jedino to.

jer uz ovaj mikroskop ja vidim sve na na laptopu, a softver koji je dosao uz njega ima dosta opcija, ukljucujuci i automatsko brojanje.


mogu snimati video klipove i raditi screen shotove stanja na stakalcu, a ima jos dosta korisnih opcija sa kontrastom, svjetlom itd.

mogu zamisliti kako je naporno u onom polozaju kad se gleda kroz okular, brojati tolike celije. pa ti onda jedna pobjegne, pa sve ispocetka

[Rodney]

Mikroskop u homebrewingu

Tehnologija ubija! Tražim gdje da lajkam ovaj zadnji post u kojem se rasčlanuje skalamerija od ovog sa kamerom

[pivska mušica]

RE: Mikroskop u homebrewingu

Tehnologija ubija! Tražim gdje da lajkam ovaj zadnji post u kojem se rasčlanuje skalamerija od ovog sa kamerom

tehnologija, bas. ko sto rece ona pjesma, oni sto dolaze za nama sklapat ce prijateljstva putem kucnog kompjutera i umjesto sljivovice ispijati case etera

usb kamera se moze kupiti i za stari, manuelni mikroskop.

http://www.ebay.com/itm/5-0-Mega-Pixel-U...2c784299e9


inace, ti mikroskopi sto aco kaze skalamerija, ti stari koji se mogu naci za jeftine pare, sigurno imaju odlicnu optiku i puno bolju kvalitetu prikaza i uvecanja od ovog koji sam ja uzeo.

[pivska mušica]

RE: Mikroskop u homebrewingu

inače, kad smo kod kvalitete prikaza, evo kako izgleda ćelija kvasca pod elektronskim mikroskopom



tacno se vide ovi oziljci od diobe. super slika.

[ale ale]

RE: Mikroskop u homebrewingu

Ovo super